Localización de proteína filamentada en mitocondria en Saccharomyces cerevisiae

Abstract

La capacidad de las proteínas para autoensamblarse en estructuras complejas como filamentos y fibrillas es fundamental para numerosas funciones celulares, incluyendo el metabolismo y la respuesta al estrés. Sin embargo, ciertas mutaciones puntuales pueden inducir la formación anómala de estas estructuras, afectando su función o provocando su pérdida. Este fenómeno está relacionado con diversas patologías, como la anemia de células falciformes o trastornos neurodegenerativos como el Alzheimer. Este trabajo se centra en el estudio del efecto de una proteína filamentada dirigida a un compartimento celular específico, concretamente la proteína 1-pok unida a YFP (Yellow Fluorescent Protein), en células de levadura Saccharomyces cerevisiae. Se trabajó con varias versiones de esta proteína: una versión silvestre (wild type), una mutante que forma fibras (E239Y), una inactiva (R169M) y otra con ambas mutaciones. El objetivo principal fue comprobar si se forman fibras dentro de los compartimentos celulares y cómo reacciona la célula ante esto. Para ello, se diseñaron plásmidos con secuencias de localización específicas, se amplificarán por PCR, se clonaron en bacterias (Escherichia coli), y luego se transformaron células de levadura (S. cerevisiae). Durante el desarrollo del proyecto se completaron exitosamente las fases experimentales principales: diseño del plásmido mediante herramientas bioinformáticas, amplificación por PCR con recombinación homóloga, digestión con DpnI, clonaje y selección en E. coli, purificación del ADN plasmídico, linealización del constructor y transformación de células competentes de S. cerevisiae con marcador mitocondrial COX4-mScarlet para estudios de colocalización.

La capacidad de las proteínas para autoensamblarse en estructuras complejas como filamentos y fibrillas es fundamental para numerosas funciones celulares, incluyendo el metabolismo y la respuesta al estrés. Sin embargo, ciertas mutaciones puntuales pueden inducir la formación anómala de estas estructuras, afectando su función o provocando su pérdida. Este fenómeno está relacionado con diversas patologías, como la anemia de células falciformes o trastornos neurodegenerativos como el Alzheimer. Este trabajo se centra en el estudio del efecto de una proteína filamentada dirigida a un compartimento celular específico, concretamente la proteína 1-pok unida a YFP (Yellow Fluorescent Protein), en células de levadura Saccharomyces cerevisiae. Se trabajó con varias versiones de esta proteína: una versión silvestre (wild type), una mutante que forma fibras (E239Y), una inactiva (R169M) y otra con ambas mutaciones. El objetivo principal fue comprobar si se forman fibras dentro de los compartimentos celulares y cómo reacciona la célula ante esto. Para ello, se diseñaron plásmidos con secuencias de localización específicas, se amplificarán por PCR, se clonaron en bacterias (Escherichia coli), y luego se transformaron células de levadura (S. cerevisiae). Durante el desarrollo del proyecto se completaron exitosamente las fases experimentales principales: diseño del plásmido mediante herramientas bioinformáticas, amplificación por PCR con recombinación homóloga, digestión con DpnI, clonaje y selección en E. coli, purificación del ADN plasmídico, linealización del constructor y transformación de células competentes de S. cerevisiae con marcador mitocondrial COX4-mScarlet para estudios de colocalización.

La capacidad de las proteínas para autoensamblarse en estructuras complejas como filamentos y fibrillas es fundamental para numerosas funciones celulares, incluyendo el metabolismo y la respuesta al estrés. Sin embargo, ciertas mutaciones puntuales pueden inducir la formación anómala de estas estructuras, afectando su función o provocando su pérdida. Este fenómeno está relacionado con diversas patologías, como la anemia de células falciformes o trastornos neurodegenerativos como el Alzheimer. Este trabajo se centra en el estudio del efecto de una proteína filamentada dirigida a un compartimento celular específico, concretamente la proteína 1-pok unida a YFP (Yellow Fluorescent Protein), en células de levadura Saccharomyces cerevisiae. Se trabajó con varias versiones de esta proteína: una versión silvestre (wild type), una mutante que forma fibras (E239Y), una inactiva (R169M) y otra con ambas mutaciones. El objetivo principal fue comprobar si se forman fibras dentro de los compartimentos celulares y cómo reacciona la célula ante esto. Para ello, se diseñaron plásmidos con secuencias de localización específicas, se amplificarán por PCR, se clonaron en bacterias (Escherichia coli), y luego se transformaron células de levadura (S. cerevisiae). Durante el desarrollo del proyecto se completaron exitosamente las fases experimentales principales: diseño del plásmido mediante herramientas bioinformáticas, amplificación por PCR con recombinación homóloga, digestión con DpnI, clonaje y selección en E. coli, purificación del ADN plasmídico, linealización del constructor y transformación de células competentes de S. cerevisiae con marcador mitocondrial COX4-mScarlet para estudios de colocalización.

Objectius de Desenvolupament Sostenible::3 - Salut i Benestar

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