Estudio de los mecanismos terapéuticos en la inducción de tolerancia immunológica en un modelo animal de esclerosis múltiple

Abstract

En una serie de estudios previos demostramos que la infusión de células de médula ósea (MO) modificadas genéticamente para la expresión del autoantígeno MOG40-55 en ausencia de mieloablación inducía tolerancia antígenoespecífica en un modelo murino de esclerosis múltiple. También observamos que este efecto terapéutico no requería injerto hematopoyético. Nos propusimos estudiar si el efecto tolerogénico está inducido por una subpoblación de células generadas durante la transducción de la MO y el papel de las células T reguladoras en la inducción de la tolerancia. Las células de MO fueron cultivadas y transducidas usando medio complementado con 20% FCS y medios condicionados como fuente de stem cell factor (SCF) e IL-3 murinos. Las diferentes poblaciones celulares se separaron por citometría de flujo y se analizó la capacidad supresora de las poblaciones candidatas. Por otro lado se analizó la presencia de células T reguladoras en bazo y SNC de los ratones recuperados después de la infusión de células de MO transducidas. A los cinco días de cultivo, la mayoría de células presentaban fenotipo mieloide (Mac-1+Gr-1low/-:31,9+-10,2%; Mac-1+Gr-1high:26,0+-3,3%). Ambos fenotipos se corresponden con dos subpoblaciones de células mieloides supresoras (MDSC, tipo monocí¬tico y granulocítico respectivamente) descritas recientemente. Se estudió la capacidad de ambas poblaciones para suprimir la respuesta proliferativa específica de esplenocitos frente a MOG40-55 in vitro, observando una mayor capacidad de supresión de las MDSC monocíticas, que se correspondí¬a con niveles significativamente superiores de actividad de las enzimas arginasa-1 y sintasa de óxido nítrico (ambos mecanismos supresores característicos de las MDSC). A los 7 días del tratamiento no se observaron diferencias significativas en el porcentaje de células T reguladoras (Treg y Tr1) entre el grupo tratado (liM) y los grupos de control.

We previously reported that the infusion of murine bone marrow cells (BMC) expressing an autoantigen (MOG40-55) into non-myeloablated recipients induced tolerance to the autoantigen that prevented and improved experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), even in absence of engraftment. To this end, we have transduced using our standard conditions (medium with 20% FCS, conditioned media containing murine stem cell factor and mIL-3. The candidate cell subpopulations were sorted and their supression activity was analyzed. In addition, we analyzed the percentages of regulatory T cell in treated mice. At day +5 the vast majority of the transduced cells cultured expressed myeloid markers (Mac-1+ Gr-1low/- (31,9 +-10,2%) or Mac-1+ Gr-1high (26+-3,3%). The phenotypes of these two myeloid cell subpopulations correspond to those of the two (monocyte-like and granulocyte-like, respectively) subtypes of myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that have been recently reported. To further characterize their functionality we analyzed the ability of transduced total BMC and the sorted candidate cell subpopulations to suppress the proliferative response of splenocytes from mice with EAE to autoantigen challenge.