Desarrollo y validación de ensayos rápidos para la detección de aeroalérgenos ocupacionales/ambientales: soja i proteinas séricas de paloma

Abstract

Tanto el asma ocupacional como la neumonitis por hipersensibilidad, como es el pulmón del cuidador de aves, son patologías respiratorias que se pueden prevenir o disminuir su aparición mediante la evitación de la fuente antigénica. Para poder actuar de forma preventiva es de utilidad el disponer de ensayos rápidos que sean capaces de estimar la presencia de alérgeno de forma inmediata. En el marco de este proyecto de dos años de duración tenemos por objeto el desarrollar y estandarizar dos métodos rápidos, inmunocromatográficos, para la determinación de alérgenos de soja y de proteínas séricas de paloma. Alérgenos que han sido seleccionados por su importancia en el medio como agentes causales de asma y neumonitis por hipersensibilidad, respectivamente. También tenemos por objeto determinar la carga de alérgeno de soja en la fracción de partículas menores de 10 micrómetros (PM10) en los alrededores del puerto de Barcelona y comprarla con los niveles en los filtros de partículas suspendidas totales (TSP). Como pasos previos al desarrollo de los ensayos rápidos se han producido anticuerpos específicos frente al extracto de cáscara de soja de bajo peso molecular y frente al suero de paloma, se ha desarrollado un ELISA tipo sándwich para cada alérgeno y parte de los anticuerpos se ha conjugado con oro coloidal. El ensayo inmunocromatográfico para la soja presenta un límite de detección de 6.25ng/ml y ha sido validado mediante el análisis de 119 muestras ambientales, presentando una elevada especificidad y sensibilidad. El ensayo inmunocromatográfico para la determinación de antígenos séricos de paloma requiere ser validado. Mediante un métodos de ELISA de inhibición se han determinado los niveles de alérgeno de soja en filtros PM10 y TSP. A pesar de la buena correlación entre los niveles de alérgeno en ambos filtros, se observó una amplia variación en la proporción PM10/TSP entre días.

Allergen avoidance can help prevent or reduce occupational asthma and hypersensitivity pneumonitis such as bird breeder’s lung. In order to prevent these lung diseases from ocurring it is helpful to have rapid tests able to estimate the presence of allergen immediately. During this two years project, we aim to develop and standardize two rapid immunochromatographic tests to determine soy allergens and pigeon serum antigens. Those allergens have been chosen for their importance in our environment as causative agents of asthma or hypersensitivity pneumonitis, respectively. We also aim to determine the burden of soy bean allergen in soy particles smaller than 10 micrometers (PM10) in the vicinity of the port of Barcelona and compare those levels with levels in the filters of total suspended particles (TSP). As a previous step for the development of both immunochromatographic tests, specific antibodies were produced against soybean hull low molecular weight extract and pigeon serum, a sandwich ELISA was developed for each allergen and part of the antibodies was conjugated to colloidal gold. The limit of detection of the immunochromatographic test to determine soy allergens was 6.25 ng/ml and the test was validated by analysing 119 environmental samples and showed high sensitivity and specificity. The immunochromatographic test for determining pigeon serum antigens require validation. Soy allergen levels in PM10 and TSP filters were analysed by inhibition ELISA method.