Abstract:
|
La producció del factor antihemofílic A (FAHA) utilitza una columna cromatogràfica d’afinitat per tal de purificar el complex del FAHA (FAHA:FvW), la qual està alimentada pel crioprecipitat del plasma humà, pre-tractat amb S/D (Solvent/Detergent) parcialment purificat. Per optimitzar el procés, en aquest estudi es vol reduir el volum de columna al màxim, injectant el mateix material de partida a la columna. Per tal d’aconseguir els mateixos rendiments i la mateixa quantitat, o menys, d’impureses, es modifica el material de partida, ajustant-lo amb 100 mM de NaCl, i variant el seu pH. Per aconseguir el pH més idoni es proven diversos pH: 6,3; 6,5; 6,7 i 6,8. Les columnes utilitzades per portar a terme les proves són de 50ml i després passen a ser de 150ml, per fer més pràctic el procés . Aquestes columnes estan empaquetades amb una resina d’un glicosaminoglicà porcí. Es treballa amb un Äkta prime plus, unit a la columna per tal de monitoritzar les DO, conductivitats i pH’s. Després d’eluir el complex del FAHA es realitza una concentració amb un ultrafiltre per deixar l’eluït a 3,5 UA. Les experiències realitzades mostren que el pH òptim de treball per aconseguir un millor rendiment de FAHA es troba dins l’interval de pH 6,5-6,7. Amb aquest interval de pH també es trobarien les millors condicions per minimitzar la presència de més proteïnes acompanyants com són el fibrinogen, la fibronectina, l’antitrombina, el FII, l’hemopexina, l’haptoglobulina, la glicoproteïna alfa 1 àcida, l’antitripsina alfa 1, l’albúmina i la immunoglobulina G. |