|
Títol:
|
Pèptids AT-Hook i proteïna HMGA1a(A50-91) humana. Expressió, purificació i cristal·lització amb oligonucleòtids
|
|
Autor/a:
|
Rodríguez Puente, Sonia
|
|
Altres autors:
|
Universitat Politècnica de Catalunya. Departament d'Enginyeria Química; Saperas Plana, Núria; Campos López, Josefina de Lourdes |
|
Abstract:
|
La proteïna HMGA1a humana és una proteïna que es troba al nucli de les cèl·lules i que pot
modificar la conformació espacial del DNA regulant l’expressió de molts gens. Se sap que la
interacció es dóna a través d’uns motius d’unió al DNA denominats AT-hooks que s’uneixen
preferentment a regions riques en ATs del solc estret del DNA. D’aquesta manera l’HMGA1a
influeix en molts processos cel·lulars normals com són el creixement cel·lular, la diferenciació
cel·lular o la reparació del DNA. D’altra banda, les proteïnes HMGA estan relacionades amb
nombrosos processos patològics, entre ells el càncer.
Per a comprendre com actua aquesta proteïna és molt important arribar a determinar l’estructura
tridimensional dels seus complexos amb el DNA. Amb aquest objectiu s'ha intentat aconseguir
complexos cristal·litzats d'aquesta proteïna o motius d'unió al DNA (pèptids AT-hook) amb
oligonucleòtids. Concretament s’ha treballat amb la forma HMGA1a(A50-91) i els pèptids
corresponents a les regions AT-hook I, II i III.
Primerament s’ha obtingut la forma HMGA1a(A50-91) amb la tècnica del DNA recombinant
mitjançant la seva expressió en un cultiu del bacteri Escherichia coli i s’ha purificat fins obtenir
una fracció prou pura i concentrada pels estudis cristal·logràfics. Les tècniques emprades han
estat la cromatografia de bescanvi iònic i la de gel filtració.
En segon lloc, s’han realitzat tot un seguit d’assajos cristal·logràfics mitjançant la tècnica de
difusió de vapor amb gota penjada:
- Proteïna HMGA1a(A50-91) amb els següents oligonucleòtids: CGCAT2A2TGCG,
A2TA2T2AT2 iCGCGAT2A2T.
- Pèptids AT-hook amb els oligonucleòtids CGCAT2A2TGCG, A2TA2T2AT2,
CGCGAT2A2T i GGGAAATTCCTC.
A partir dels vuitanta assajos realitzats, es van poder congelar vint-i-tres cristalls que van ser
analitzats per difracció de raigs X al sincrotró de Grenoble (ESRF).
Finalment, s’han obtingut els paràmetres de la cel·la unitària i el sistema cristal·lí de dos
complexos de pèptid-DNA. |
|
Matèries:
|
-Àrees temàtiques de la UPC::Enginyeria química::Biotecnologia
-Peptides
-Proteins
-Cells
-Bioengineering
-Pèptids
-Proteïna
-Cèl·lules
-Bioenginyeria |
|
Drets:
|
|
|
Tipus de document:
|
Treballs d'investigació/Fi de màster |
|
Publicat per:
|
Universitat Politècnica de Catalunya
|
|
Compartir:
|
|
