Aquest treball es basa en l’estudi de dues malalties lisosòmiques: la malaltia de Niemann-Pick A/B (NPAB) i la malaltia de Niemann-Pick tipus C (NPC). En relació a la malaltia de NPAB, s’ha realitzat l’expressió in vitro d’algunes de les mutacions de canvi d’aminoàcid trobades en pacients espanyols per tal de detectar les activitats enzimàtiques residuals. Totes les mutacions presenten una activitat molt baixa, gairebé nul•la, excepte la p.L225P i la R608del que tenen un 11% i 20% d’activitat respectivament. Els resultats obtinguts són coherents amb la severitat del fenotip que presenten els pacients. D’altra banda, s’ha caracteritzat un al•lel amb una mutació que afecta a una posició poc conservada d’un donador de splicing i que produeix la generació de trànscrits aberrants corresponents a trànscrits minoritaris de SMPD1, prèviament descrits, que no codifiquen per proteïna funcional. Respecte a malaltia de NPC, s’ha realitzat una anàlisi molecular de pacients espanyols prèviament estudiats identificant, en la majoria dels casos, la segona mutació responsable de la patologia. S’ha descrit per primer cop per aquesta malaltia una gran deleció que inclou el gen NPC1 i altres gens flanquejants i s’ha estudiat l’efecte que tenen les mutacions de splicing trobades a nivell de RNA. Per una d’aquestes mutacions, c.1554-1009G&A, s’ha assajat amb èxit una estratègia terapèutica basada en la utilització d’oligonuclèotids antisentit. D’altra banda, s’està desenvolupant un model cel•lular neuronal de la malaltia de Niemann-Pick tipus C, basat en la utilització de RNAs d’interferència, sobre el qual es podran assajar possibles estratègies terapèutiques en un futur.

The present work is based on the study of two lysosomal storage disorders: Niemann-Pick types A/B (NPAB) and Niemann- Pick type C (NPC) disease. Regarding NPAB disease, several missense mutations found in Spanish patients were expressed in vitro in order to detect their residual enzymatic activities. All the mutations showed very low residual activity except for p.L225P and p.R608del that retained a residual activity of 11% and 20%, respectively. These results are consistent with the phenotype observed in the patients. Moreover, an allele with a mutation affecting a noncanonical donor splice site has been characterized. It produces only aberrant mRNAs, corresponding to previously reported nonfuntional SMPD1 minor transcripts. Concerning NPC disease, a molecular analysis has been carried out in several Spanish patients identifying the second mutation responsible for the disease in the majority of the cases. A large deletion which includes the NPC1 gene and other chromosome 18 flanking genes has been described for the first time in this disease and for all the splice site mutations, the formation of abnormal spliced transcripts has been confirmed by RNA analysis. An antisense therapeutics approach has been successfully used to correct aberrant splicing due to c.1554-1009G&A mutation. Furthermore, a neuronal cellular model is being developed for Niemann-Pick type C disease using RNA interference that might be used to assess the effectiveness of other possible treatments in the future.