Aquest article descriu els sensors enzimàtics i immunosensors
electroquímics que s’han desenvolupat als nostres grups per a
la detecció de la biotoxina marina àcid okadaic (OA), i discuteix
la possibilitat d’integrar-los en programes de seguiment. Els
sensors enzimàtics per a OA que es presenten es basen en la
inhibició de la proteïna fosfatasa (PP2A) per aquesta toxina i la
mesura electroquímica de l’activitat enzimàtica mitjançant l’ús
de substrats enzimàtics apropiats, electroquímicament actius
després de la seva desfosforació per l’enzim. Els immunosensors
electroquímics descrits en aquest article es basen en un
enzimoimmunoassaig sobre fase sòlida competitiu indirecte
(ciELISA), amb fosfatasa alcalina (ALP) o peroxidasa (HRP)
com a marcatges, i un sistema de reciclatge enzimàtic amb diaforasa
(DI). Els biosensors presentats aquí s’han aplicat a
l’anàlisi de dinoflagel·lats, musclos i ostres. Les validacions
preliminars amb assaigs colorimètrics i LC-MS/MS han demostrat
la possibilitat d’utilitzar les bioeines desenvolupades
per al cribratge preliminar de biotoxines marines en mostres de
camp o de cultiu, que ofereixen informació complementària a
la cromatografia. En conclusió, tot i que encara cal optimitzar
alguns paràmetres experimentals, la integració dels biosensors
a programes de seguiment és viable i podria proporcionar
avantatges respecte a altres tècniques analítiques pel que fa al
temps d’anàlisi, la simplicitat, la selectivitat, la sensibilitat, el fet
de poder ser d’un sol ús i l’efectivitat de cost.
This article describes the electrochemical enzyme sensors and
immunosensors that have been developed by our groups for
the detection of marine biotoxin okadaic acid (OA), and discusses
the possibility of integrating them into monitoring programmes.
The enzyme sensors for OA reported herein are
based on the inhibition of immobilised protein phosphatase 2A
(PP2A) by this toxin and the electrochemical measurement of
the enzyme activity through the use of appropriate enzyme substrates,
which are electrochemically active after dephosphorylation
by the enzyme. The electrochemical immunosensors described
in this article are based on a competitive indirect Enzyme-
Linked ImmunoSorbent Assay (ciELISA), using alkaline
phosphatase (ALP) or horseradish peroxidase (HRP) as labels,
and an enzymatic recycling system with diaphorase (DI). The
biosensors presented herein have been applied to the analysis
of dinoflagellates, mussels and oysters. Preliminary validations
with colorimetric assays and LC-MS/MS have demonstrated
the possibility of using the developed biotools for the preliminary
screening of marine biotoxins in field or cultured samples, offering
complementary information to chromatography. In conclusion,
although optimisation of some experimental parameters is
still required, the integration of biosensors into monitoring programmes
is viable and may provide advantages over other analytical
techniques in terms of analysis time, simplicity, selectivity,
sensitivity, disposability of electrodes and cost effectiveness. |