Abstract:
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La transtirretina (TTR) es una proteína plasmática, involucrada en el
transporte de la tiroxina y del retinol. Su forma wild-type y sus diferentes mutantes
están asociados a diferentes amiloidosis, siendo la mutación Y78F la más
amiloidogénica.
El presente trabajo tenía como principal objetivo la producción y purificación
de lotes de hTTR Y78F y la identificación de posibles modificaciones posttraduccionales
en el residuo de cisteína.
La expresión de la proteína se dio en E. coli a escala biorreactor y las
técnicas básicas de purificación incluyeron disrupción celular, precipitación
fraccionada de proteínas y cromatografías de intercambio iónico y de gel filtración.
Para la identificación de las modificaciones post-traduccionales se usó la técnica de
MALDI-TOF.
Durante este trabajo, se pudo confirmar que la producción de TTR en
biorreactor, incluso sin haber estado optimizado, es mucho más ventajosa que en
erlenmeyer, tanto en términos de cantidad de proteína recuperada como en términos
de productividad volumétrica. También se observó que, para las condiciones
experimentadas, un tiempo de inducción de aproximadamente 4 horas es lo más
indicado.
Con relación a las modificaciones post-traduccionales se observó que están
presentes a lo largo de toda la inducción, que su perfil temporal no varía en un
mismo experimento y que son removibles con el agente reductor DTT. |