Utilizad este identificador para citar o enlazar este documento: http://hdl.handle.net/2072/196180

Paper de la quinasa IKKalpha al càncer colorectal
Margalef González, Pol
Agència de Gestió d'Ajuts Universitaris i de Recerca; Bigas Salvans, Anna,
Prèviament havíem identificat la presència d’una forma de l’IKKα de 45kD que s’expressa específicament en el nucli de les cèl.lules de cancer colorectal. A més havíem demostrat que aquesta forma estava fosforilada la qual cosa suggereix que es tracta d’una forma activa d’IKKa. Un dels objectius que ens varem plantejar va ser determinar el mecanisme per el qual es generava aquesta forma de la quinasa. Mitjançant eines bioinformàtiques hem identificat possibles llocs de processament proteolític en la seqüència d’IKKα que podrien ser responsables de generar el fragment de 45kD present en les cèl.lules tumorals. Després, hem demostrat que les proteases identificades in silico són capaces de processar IKKa in vitro, específicament en els llocs predits. S’ha pogut constatar, mitjançant la mutació dels possibles llocs de processament, que només un dels llocs identificats bioinformàticament corresponent a Cathepsin B/L era funcional in vitro, mentre que els altres llocs predits no ho eren. D’igual manera, l’expressió ectòpica de la Cathepsin B o L és capaç de produïr el processament d’IKKα. Pel contrari, la inhibició de l’activitat de la proteasa mitjançant inhibidors específics és capaç de bloquejar el processament d’IKKa en cèl.lules tumorals. Finalment, hem demostrat que els nivells de la Cathepsin B i L, proteases identificades com a responsables de processar IKKa es troben sobre-expressades en la majoria de les mostres humanes de càncer de colon analitzades comparat amb el teixit normal adjacent del mateixos pacients.
Previously we have identified the presence of a 45 kD new IKKa form that is expressed exclusively in the nucleus of colorectal cancer cells. Moreover, we have demonstrated that this new form is phosphorylated, suggesting that it is an activated form of IKKa. One of the main objectives of the project was to identify the mechanism by which this new IKKa form was generated. By the use of bioinformatic tools we have identified possible proteolitic cleavage sites in IKKa sequence that could be responsible for the generation of the 45 kD fragment present in the tumoral cells. After this, we have demonstrated that the proteases identified in silico are able to process IKKa in vitro, specifically in the identified sites. We have been able to demonstrate, by the mutation of the possible processing sites, that only one of the bioinformatically identified sites corresponding to Cathepsin B/L is functional in vitro, whereas the other ones are not. In the same direction, ectopic expression of Cathepsin B or L is able to induce the processing of IKKa. By the contrary, inhibition of cathepsin activity by the use of specific inhibitors is able to block the processing of IKKa in tumoral cells. Finally, we have demonstrated that the levels of Cathepsin B and L, proteases identified as responsible of IKKa processing, are overexpressed in the great majority of the colorectal cancer samples that we have analyzed in comparison with normal adjacent tissue from the same patient.
23-05-2012
57 - Biologia
Còlon -- Càncer -- Aspectes cel·lulars
Proteïnes quinases
L'accés als continguts d'aquest document queda condicionat a l'acceptació de les condicions d'ús establertes per la següent llicència Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/
7 p.
Artículo
Els ajuts de l'AGAUR;2010FIB00060
         

Documentos con el texto completo de este documento

Ficheros Tamaño Formato
2010FIB00060_Margalef Gonzalez.pdf 2.405 MB PDF

Mostrar el registro completo del ítem